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发布时间:2022-08-02点击数: 454
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输卵管积水会影响胚胎着床,输卵管积水会导致输卵管堵塞,从而影响卵子和精子的受精过程,如果输卵管里有积水也会影响已经形成的受精卵向宫腔内的移动过程,也有可能导致受精卵到达输卵管的时间与子宫内膜的发育不同步,同时它的回流可能导致胚胎着床的发育,不能够正常着床而影响正常受孕过程。

有输卵管积水的情况下,应当先采取适当的措施积极治疗,原发疾病治愈后再考虑怀孕,只有治疗好后才有可能使受精卵能够顺利的通往子宫,这样才能孕育成功的结晶。为了帮助输卵管积水的女性跟方便的了解到输卵管有积水对胚胎着床的影响主要有以下几点:

1.输卵管积水会使女性的激素水平就会下降,从而导致子宫内膜受损;

2.输卵管里的积水会影响胚胎和子宫内膜的接触;

3.输卵管积水受精卵就会无法正常到达宫腔,从而停在输卵管的以外的位置,影响胚胎的着床。



ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。



样本制备指南


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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20min,取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血,高血脂样品


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2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

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,样品采集后30min内于2-8℃,1000×g离心15min,取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

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用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10min,取上清检测。

其余方法:在分析天平(AL204型)上,称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液;并用小剪刀等工具将组织样本剪碎(尽可能小块)。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪,将超声破碎仪的功率调至25%,超声时间2s,间隔时间5s,总时间2min。放入样本,冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后,将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要,建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上,较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。


4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5min后收集细胞;

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

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个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。

其余方法:

对于

贴壁细胞

:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

:离心收集细胞,以2×10

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细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10

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细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。



5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。

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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。


在一个家庭中,孩子是最重要的成员,也是给恋人的一份最美好的礼物。但有一些人因为工作、学术或身体等各种原因导致无法生育,给很多家庭带来了遗憾。但随着医学技术的发展,一些不孕不育的家庭的因为试管婴儿变得健全。但对于试管婴儿这项技术,或多或少还是存在一些质疑和谣言,他们觉得试管婴儿可能没有正常生育婴儿聪明、寿命短、身体素质差等等一些问题。

试管婴儿的寿命

为了更好的研究和确保试管婴儿这一技术,相关人员都会对试管婴儿建立档案并跟踪调查,包括发病率、智力、人格、性格等各方面都会进行观察记录。现如今很多的试管婴儿也都已经为人父母了,并没有发现他们有什么异于常人的地方。一个人的寿命的长短不是取决于受孕的方式,而是由他的身体健康状况和其他各种外部因素限制着。

除开那些突发因素导致的死亡,试管婴儿会和正常的孩子一样出生、长大、正常结婚生子,经历生老病死。其实试管婴儿和正常婴儿一样是需要在子宫里培育,经过分娩生产出来的,所以是不会影响到孩子的寿命的。而且试管婴儿的精子和卵子都是经过严格筛选的,考虑优生优育的因素,试管婴儿在智力发育、寿命和健康方面与正常婴儿是没有什么区别的。

试管婴儿跟正常婴儿的差别。

事实上,试管婴儿和自怀婴儿没有什么区别的,唯一的差别就是受孕的地方不同而已。自然怀孕是在输卵管里受精,而试管婴儿是在试管里面受精。从另外一种角度来讲,自然怀孕是自然形成的、随机的,遵循的是“优胜劣汰”的自然规律。且不能进行筛选,无法决定精子、卵子的好坏,基因完全遗传了父母双方,因此出生的婴儿携带父母身上遗传病的几率会增大。

而试管婴儿是人工分别从男女双方体内取出精卵,再选择最为优质的精子和卵子,在体外受精形成受精卵培育成胚胎之后,再挑选最优质健康的胚胎移植回母体。不管是自然受孕还是试管婴儿,都是同一个父母的精卵结合孕育出来的,孩子还是那个孩子,没什么差别。

试管婴儿的利弊。

试管婴儿的好处:为大部分不能顺利怀孕的家庭带来孩子带来希望,甚至是可以自己选择什么时候怀孕;可以主动选择更优质的精子和卵子培育成受精卵,胚胎质量要比自然受孕的好,优生优育;试管婴儿有胎儿性别选择功能。

试管婴儿的坏处:花费太高,对于普通的家庭来说经济压力很大;催卵取卵可能对女性的身体健康有一定的影响;对女性造成很大的精神和心理负担,怕受孕失败。

所以总体来说,如果夫妻双方身体健康还是自然怀孕为好,而如果不能顺利怀孕也不要对试管婴儿存在什么误解,认为试管婴儿比正常婴儿差。试管婴儿是科学,如果实在想要自己的孩子,至少别因为这些偏见而错失属于自己的孩子。

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参考资料